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StarMut隨機(jī)突變?cè)噭┖?/div>
StarMut Random Mutagenesis Kit
貨號(hào) 規(guī)格 目錄價(jià) 北京庫(kù)存 太倉(cāng)庫(kù)存 廣州庫(kù)存
T115-01 20 rxn ¥1469

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

隨機(jī)突變是闡述蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能之間的關(guān)系、改進(jìn)蛋白質(zhì)性能的重要工具。StarMut 隨機(jī)突變?cè)噭┖谢谝族e(cuò) PCR(error-prone PCR)技術(shù),利用 Taq DNA polymerase 不具有 3′→5′ 校對(duì)功能的特性,在特定的反應(yīng)緩沖體系中,向擴(kuò)增的目的基因中引入隨機(jī)突變密碼子。帶有隨機(jī)突變的擴(kuò)增產(chǎn)物通過雙酶切,連接到表達(dá)載體中構(gòu)建文庫(kù),然后轉(zhuǎn)化入表達(dá)宿主中,進(jìn)行蛋白活性篩選。如果經(jīng)一次突變反應(yīng)不能獲得滿意的結(jié)果,可采用連續(xù)易錯(cuò) PCR(sequential error-prone PCR)策略,即將一次 PCR 擴(kuò)增得到的有用突變基因作為下一次 PCR 擴(kuò)增的模板,連續(xù)反復(fù)地進(jìn)行隨機(jī)誘變,使每一次獲得的突變累積而產(chǎn)生更有意義的突變。本試劑盒包含有優(yōu)化的 2×StarMut Random System、StarMut Enhancer 和 Sterile Water 三種組分,使用時(shí)只需加入適量的 DNA 模板和合成的兩條擴(kuò)增引物,并用水補(bǔ)足體積,即可進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng),操作簡(jiǎn)便快速,大大減少了多次加樣可能造成的出錯(cuò)和污染機(jī)會(huì)。2×StarMut Random System 含有優(yōu)化濃度的 Taq DNA polymerase、dNTPs、反應(yīng)緩沖液和穩(wěn)定劑,可最大限度地克服常規(guī)易錯(cuò) PCR 技術(shù)中,由于 Taq DNA polymerase 本身的偏愛性造成的以 GC 突變?yōu)橹鞯娜秉c(diǎn),獲得相對(duì)均衡的突變譜。堿基突變率可通過適量添加 StarMut Enhancer、調(diào)整模板 DNA 量和改變 PCR 擴(kuò)增循環(huán)數(shù)進(jìn)行控制。

下表列出以 10 ng 質(zhì)粒 DNA 為模板,PCR 擴(kuò)增一條 1 kb DNA 片段(20個(gè)循環(huán))后測(cè)序檢測(cè)得到的突變率結(jié)果。需要注意的是,由于不同 DNA 模板的堿基組成不同、長(zhǎng)度不一,以及不同引物的擴(kuò)增效率存在差異,所以即使在相同的 PCR 反應(yīng)條件下,兩組 PCR 產(chǎn)物所得到的突變率也可能不同。因此我們建議根據(jù)實(shí)驗(yàn)的具體要求,首先進(jìn)行多個(gè)小體系(20 μl)擴(kuò)增預(yù)實(shí)驗(yàn),分別加入不同體積的 StarMut Enhancer(如 0 μl、1μl、5 μl、10 μl 等),摸索出符合目標(biāo)突變率的反應(yīng)條件后,再放大擴(kuò)增體系。其他影響突變率的因素見【注意事項(xiàng)】

 

以 50 µl PCR 反應(yīng)體系為例:

反應(yīng)條件 1 2 3 4 5 6
StarMut Enhancer(μl) 0 1 2.5 5 10 20
突變堿基的個(gè)數(shù)/1 kb 0~1 0~3 0~4 1~6 3~10 5~18
平均突變堿基數(shù)/1 kb 0.3 1.6 2.3 4.1 6.5 10.2
 
本試劑盒適用于擴(kuò)增低于 4 kb、GC 含量在 70% 以下的目標(biāo) DNA 片段。

產(chǎn)品組分

組分貨號(hào) 組分名稱 T115-01
ZT115-101 2×StarMut Random PCR Mix 500 μl
ZT115-102 StarMut Enhancer 400 μl
ZA129-101 Sterile Water 1 ml

保存條件

-20℃ 保存,保質(zhì)期 12 個(gè)月;經(jīng)常使用,可于 4℃ 保存,保質(zhì)期 3 個(gè)月。

產(chǎn)品變更

該產(chǎn)品原中文名稱為:StarMut 隨機(jī)突變?cè)噭┖?。?2022.4.12 起變更為現(xiàn)用名。

請(qǐng)按照實(shí)際實(shí)驗(yàn)情況進(jìn)行使用,如有疑問,請(qǐng)聯(lián)系您的業(yè)務(wù)員或致電技術(shù)支持熱線01069738797!

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